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技術(shù)文章

 PCR實(shí)驗室的基礎知識

2021-02-10 11:03:38

  PCR實(shí)驗室又叫基因擴增實(shí)驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱(chēng)。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過(guò)DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。PCR實(shí)驗室的建立方法如下:

  1、建立樣品準備區:專(zhuān)門(mén)用作樣品的準備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應該采取預防措施:⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。⑵組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應該用有專(zhuān)門(mén)的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應該用單獨包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。⑹管子打開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,而且管子不能用力崩開(kāi),這樣會(huì )產(chǎn)生氣溶膠。⑺任何時(shí)候都應該穿實(shí)驗服和帶手套,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗服要專(zhuān)門(mén)用于樣品準備間,經(jīng)常清洗。

  2、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機會(huì )。為了避免這一問(wèn)題,反轉錄一步可以在樣品準備區進(jìn)行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。

  3、建立前PCR區:專(zhuān)門(mén)用于準備各種反應,這個(gè)區域必須保持干凈,而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準備的污染。前PCR區必須要有試劑和準備,特別是專(zhuān)門(mén)用于前PCR區的正壓活塞式移液管

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